在下面的章节中我们将讲述的三个简单的精子制备技术。在使用精子制备技术进行医疗应用是，无菌技术和材料必备的。

1. 简单洗涤法 (Simple washing)

对于精夜样本质量比较好的，简单洗涤法可以筛选出足够多的精子。

2. 梯度离心法 (Gradient Separation)

不连续密度梯度是选择较佳优质精子的方法，能很好地从其它类型的细胞和碎片中分离出来。此方法通过由涂有硅烷的胶态二氧化硅组成的密度梯度层与精浆进行离心，可以将细胞按密度层分离开来。此外，活动精子会主动游过梯度层，在玻璃管的底部形成一个软的颗粒。采用密度梯度离心法的精子制备过程，通常会筛选出一小部分活力较高的精子，他们没有碎片，没有含污染了的白细胞，没有非生殖细胞和退化了的生殖细胞。

  3. 上游法(Swim up)

  精子的筛选可以通过他们自己游出精浆进入培养基的能力来进行。这就是所谓的”游起来“技术。直接上游技术可以将培养基层叠到液化精液上，也可以将液化精液层叠到培养基下面。活动精子会游到培养基里面去的。

精子冷冻

医院精子实验室开设了精子冷冻服务，将精子保存在零下196摄氏度的液氮罐中，可以保存10年以上。这项服务适用于以下情况：某些男性需要做绝育手术，但可能将来要使用精子；或某些人须接受放射线治疗，可以提前将精液冷冻保存；或某些男方不能在女方取卵当天采集到精液，可以提前采集后冷冻保存。

 精子冷冻是一项极度寒冷环境下（超低温）的精子保存技术，使精子能够保存很长一段时间（长期储存），进行精子冷冻有多个原因，如：

•癌症患者在接受可能影响生育的治疗前，如：化疗、放射治疗，可能会在治疗开始之前将精液冷冻储存。

•患者需要做男性绝育手术或变性手术，可以提前将精子冷冻保存，以防未来需要生育。

• 通过手术取精（SSR）后精子冷冻，如：通过进行经皮附睾精子抽吸术(PESA)、睾丸精子抽吸术(TESA)、或睾丸附睾取精 (TESE)，将进行该次卵浆内单精子注射 (ICSI) 后剩余的精子进行冷冻，方便用于下次治疗，可帮助减少进行SSR的次数。

•患者需要接受不孕不育治疗，且男方采集精子存在问题，如：精神压力大、男方不能在取卵当天赶到，或人工授精，就可以使用冷冻保存的精子。

•减少来自患者的病毒感染，因病毒可以通过精液进行传播，如：艾滋病。如果男性患艾滋病，并正在接受抗逆转录病毒药物，一旦经检查发现精液中没有病毒，就会进行冷冻保存，以便进行IUI、IVF和ICSI，帮助降低女性从精液中感染病毒的风险。

冷冻精子的性质

与卵母细胞或胚胎干细胞相比，精子细胞体型较小，其细胞内含水量大约，细胞膜湿度大（膜流动性高），因为不饱和脂肪酸含量大，可以抵抗快速降温带来的破坏，另因每次分泌出来的精子细胞数以百万计，使精子冷冻的方法区别于且较卵母细胞或胚胎干细胞冷冻方法简单。

精子冷冻方法

普遍采用的精子冷冻方法有2种：

1. 液氮蒸汽法，液态氮蒸汽冷冻是指迅速降低温度的冷冻方法（速冻），一般在液态氮蒸汽中蒸泡8-30分钟，然后直接放入液态氮中保存。

2. 计算机控制速率冷冻法是指慢速冷却的冷冻方法（慢速冷冻），通过使用计算机辅助控制（计算机编程冷冻室），分2-3个步骤降低温度，如：第1步从22到4摄氏度，第2步从4摄氏度降温至-30摄氏度，较后1步从-30摄氏度降温至-140摄氏度，较后储存在-196摄氏度的液氮中。

这两种方法都可以帮助保存精子，然而，使用计算机控制慢速冷却，相比液氮蒸汽法能更有效地保持完整的精子形态，以及具有较高的存活率。

精子冷冻原理

   原理是使细胞内脱去部分水分，以减少在降温过程中产生冰   晶体，因为产生冰晶体会导致精子死亡。因此可采用冷冻保   护剂进行防护，防止细胞内产生冰晶体。

  精子冷冻取得成功的因素

  每个人精子冷冻取得成功与否会存在差异，同一个人每次分   泌情况也存在差别，我们能够通过检测解冻后精子的活动率   来确定精子冷冻是否成功。根据世界卫生组织（WHO）的     标准规定精子冷冻前的精子活动率 ≥ 。

精子冷冻取得成功的重要因素如下：

1. 冷冻前精子的质量。根据研究发现精子量少于2000万个（少精症）的人在解冻后的精子存活率低于正常人的精子（精子量正常）存活率，因此冷冻前选择活动能力好的精子可以帮助提高精子的存活率。

2. 精子冷冻保护剂的种类和浓度。在冷冻和解冻过程中，通过使用冷冻保护剂，使精子具备抵御不断极度冷冻环境的能力。在进行极度低温储存之前，须注入冷冻保护剂，使精子能调整其渗透度和冰点功能，使精子在冷冻储存后能够抵御冷冻和解冻环境，从而不影响精子的受精能力。

3. 冷冻和解冻时的温度。 使温度降至0摄氏度以下，直至约-80摄氏度（极度冷却）会发生剧烈的变化，在细胞体内和体外都会产生冰晶体，特别是精子细胞内产生冰晶体会导致精子死亡，因此采用合适的降温速度可帮助精子免受产生冰晶体的危害，同时还有助于将细胞内的水分吸出。